流式細胞分析儀通過鞘液包裹技術讓細胞在液流中排成單列,依次通過激光檢測區;細胞受激光照射后產生前向散射光(反映細胞大小)、側向散射光(反映細胞內部復雜度),若細胞標記了熒光染料,還會激發出特定波長的熒光信號。這些光信號被光電探測器轉化為電信號,經計算機數字化處理后,就能精準獲取細胞的形態、表面分子表達等多維信息。
基礎操作流程:
開機后完成每日管路清洗,新建實驗項目并設置對應檢測通道,將顯示采集細胞數調整為10000個。
上空白管調節電壓,將陰性細胞的熒光強度控制在10³-10?區間內,完成圈門參數的初步設定。
依次上樣對照組和待測樣本,振蕩混勻后啟動采集,待目標門內收集滿設定數量的細胞后停止記錄。
實驗結束后用清洗液沖洗管路5分鐘,再用去離子水沖洗5分鐘,完成關機操作。
故障排查:
液流壓力異常報錯:先檢查鞘液管是否彎折,重啟儀器執行管路吹掃程序,排除管路內氣泡堵塞問題。
噴嘴堵塞噴出氣泡:用10%次氯酸鈉反復沖洗,無效時用注射器在噴嘴處抽吸疏通,嚴重時可將噴嘴浸入10%次氯酸鈉中超聲1小時,再用過濾水超聲1小時清潔。
信號噪聲過高:清潔光學系統,檢查流體路由是否有殘留污染,排查激光器性能,必要時更換老化激光器。
熒光信號弱/無信號:先排查樣本染色和抗體操作,再檢查激光器、濾光片和檢測器是否正常,確認補償參數設置合理。